在威尔伏特工作的阿洛伊斯·波兰德以及其他一些人，也都观察到类似 的形体。1841年波兰德给剥兽皮工人治病，这个工人扛过一张染有炭疽病菌 的牛皮。没过几天，工人也患炭疽病死去了。8年后，波兰德在因患炭疽病 而死去的牛的血液中发现了奇异的细菌，这是一种杆状的，构成特别精细的， 不完全透明的但很结实的形体。到 1885年，波兰德虽然发表了他观察的结 果，却不敢把患炭疽病的动物血液中出现的大量有规律的杆菌确定为传染病 的病毒。在不了解波兰德观察结果的情况下，兽医学教授里德利希·布劳尔 在同一年提出同样的检验结果。随后不久，经一名法国兽医证实，在纤维组 织层也存在这种神秘形体。
但是首先实验成功的是巴黎的非官方学者卡斯米尔·约瑟夫·达维诺。 他于1863年进行了一场有意义的试验。他用新鲜的或干燥的含有杆菌的血液 使健康动物染上炭疽病！但是这位聪明的达维诺无法解释为什么传染病有时 是通过传染发作，而有时却是自发发作的？为什么偏偏在潮湿地区、河谷和 泥泞草地里出现呢？为什么有些年代出现得多，有些年代出现得少呢？
以后出现了路易斯·巴斯德。他是一位素有声望的教师、物理学家和化 学家。他在巴黎师范学校通过一次典型的实验证明，哪怕是最小生命也不会 自然发生传染病，而是在实验中染上了可怕的病菌。
巴斯德认为，患炭疽病动物的血液中的透明杆菌是炭疽病病原。但他没 有充分的理由证明这一点。当时有不少研究人员激烈地反对，他们认为这种 奇异的形体是晶体或炭疽病造成的分解物。
科赫首先提出第一个问题：这种不同寻常的形体需要无一例外地在每一 种炭疽病血液中证实吗？好像事先约好的一样，几天以后一位忧伤的农民来 找科赫，他说他的六七头最好的奶牛患传染病死掉了。科赫博士把在他这儿 就诊的病人打发回家，就匆匆跟随这个农民一起去农场。他把一堆试管都取 满动物的黑色血液，尽力安慰了这个农民，而后才回家。科赫进行了彻底的 检验，但得到的总是同一个结果。
几天后，距此很远的其他地方也传来新的炭疽病消息。科赫又上路了， 又是数小时数小时地坐在显微镜前观察。他在死亡动物的血液中总能发现有 杆菌和链球菌。
于是科赫又提出第二个问题：这些鬼东西会出现在健康动物的血液中 吗？屠宰场的师傅马上给他们的医生送来成桶的新鲜畜血。科赫反复观察， 既没有发现杆菌，也没有发现链球菌和“线团”。
科赫给自己提出了第三个问题：感状物是细菌还是病畜血液中的分泌 物？
他的研究没日没夜地进行着。心疼丈夫的艾梅·科赫夫人深知丈夫工作 的意义，她在诊室里挂上一幅巨大的褐色布帘，从而使这位孜孜不倦的学者 在小小的房间里建立起属于自己的实验室，不受干扰地进行工作。
在这些日子里，科赫一次也没有让他的小宝贝女儿格尔特鲁进入过实验 室，这样做是有原因的。
他抓到一只小白鼠 （早在儿童时代科赫就学会了这一手），在白鼠的尾 巴上割开一个小口，注入几滴患炭疽病动物的血液，然后放在一只特制的宠 子里。如果杆状形体是炭疽病菌的话，小白鼠就会像牛、羊、马和森林里的 鹿一样死去。
他彻夜不眠地等待试验结果。第二天早晨，小白鼠四脚朝天一命呜呼。 解剖结果证明肝脏肿大，血液乌黑。显微镜下出现了多次见过的景象：杆状 形体、线团和串珠……
科赫又把这只死小白鼠的一小滴血液注射给另一只健康的小白鼠。他这 样做了30次，得到的都是同样的结果。
罗伯特·科赫对此并不满足，他想亲眼见到杆状形体的生长状况。这又 该怎么做呢？答案是必须做动物体外试验。他先将一把外科手术刀放在酒精 灯上消毒，然后从一只小白鼠身上割取一块染有炭疽病的组织，放在一只摘 下来的牛眼的透明房水里，再把显微镜的载物台的温度调到相当于人体的温
第二天有一堆杂菌滋生在房水里，试验失败了。最后科赫终于做出了誉 满世界的光辉成就：他在载玻片中间制出凹型小穴，周围涂上凡士林，然后 把一小滴含炭疽病杆菌的液体滴在一张薄玻璃片上，就是所谓的盖玻片，把 它翻过来压在凡士林上，从而使盖玻片的液滴悬在载玻片的穴里，完全密封， 其他杂菌被隔绝在外面。
用这种方法可以观察细菌的活动情况。科赫在显微镜里看到：小棒儿变 稀疏了，伸展开来，彼此分离，逐渐扩散到整个视野。它们活着呢！科赫仍 不满意，这个证据还不是决定性的。如果这些杆状形体真的能引起炭疽病的 话，那么就得在没有细胞混杂，没有其他杂菌的情况下培养，即纯茵培养。
科赫自己动手做了一个培养箱。他把一小丛微生物从一个悬滴移到一种 培养基上，杆状形体增多了，形成了链状和线团体。经过8次接种后，一种 白鼠组织也不能存在了，这一定是培养的炭疽病细菌。科赫把这种菌苗注射 在白鼠、豚鼠和家兔身上，结果所有的动物都染上了炭疽病。
这位深受人们爱戴和尊敬的乡村医生，这些日子曾多次忘记给他的病人 开方子。他不顾患者等候就医，就匆忙到实验室去工作。他废寝忘食，难得 跟妻子谈一次心，也无暇陪伴女儿玩耍，通宵达旦地工作。他没有生病，也 没有感染上致命的炭疽病，这真是个奇迹！
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